Диагностические наборы
8-(8332) 29-43-35
Регистрация
|

Тромбо-тест

Оцените материал
(0 голосов)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения

тромбинового времени

Тромбо-тест

на 50 и 400 определений

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для определения тромбинового времени при диагностике нарушений конечного этапа свертывания крови.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода. Заключается в определении времени свертывания плазмы крови под влиянием тромбина стандартной активности.

Состав набора:

на 50 определений:

1.    Тромбин (лиофильно высушенный, 6-8 ед NIH во фл.)  - 4 фл.

2.    Контрольная плазма (нормальная, лиофильно высушенная)  - 1 фл.

На 400 определений:

1.    Тромбин (лиофильно высушенный, 500 ед NIH во фл.)  - 1 фл.

2.    Контрольная плазма (нормальная, лиофильно высушенная)  - 2 фл.

3.    Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл  - 1 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения тромбинового времени - в  диапазоне от 11 до 120 с.

Коэффициент вариации результатов определения тромбинового времени не превышает 10%.

Допустимый разброс результатов определения тромбинового времени в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.

 

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

·   коагулометр; при отсутствии коагулометра - секундомер, термобаня на +37оС;

·   пипетки вместимостью 0,1-1,0 мл; 10,0 мл;

·   пробирки стеклянные, цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

·   физиологический (0,9%) раствор хлорида натрия;

·   вода дистиллированная;

·   перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование - сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз, избыток цитрата натрия и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.

Внимание! При обследовании больных, получающих гепарин, рекомендуется предварительно очистить плазму от антикоагулянта (см. реагент \"Гепасорб-1\", производства фирмы \"Технология-Стандарт\").

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ

И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение тромбина

Вариант для набора на 50 определений:

В один из флаконов с тромбином внести необходимое количество дистиллированной воды (см. таблицу) и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) и легком покачивании в течение 2-3 мин. В результате получают раствор тромбина.

Свертывающая активность полученного раствора проверяется (см. ниже, а также таблицу) на свежеполученной нормальной или контрольной плазме, входящей в состав набора.

 

Ориентировочные значения нормы тромбинового времени

свертывания (в ручном и коагулометрическом вариантах)

Объем

дистиллированной

воды на флакон с тромбином, мл

Время свертывания, с

при коагулометрическом определении

при мануальном определении

2,0

11-14

12-16

3,0

15-19

17-23

5,0

20-29

24-34

Раствор тромбина рекомендуется не прогревать при температуре +37оС и хранить при комнатной температуре (+18...+25оС) не более 2 ч.

Б. Разведение контрольной плазмы

В один из флаконов с контрольной плазмой внести 0,5 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) и легком покачивании в течение 3 мин. Использовать для контроля активности тромбина (см. п. 1А), хранить при комнатной температуре не более 3 ч.

Вариант для набора на 400 определений:

А. Разведение концентрированного буфера

Содержимое флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочий раствор буфера.

Б. Разведение тромбина

1. Во флакон с тромбином внести 10,0 мл физиологического (0,9%) раствора хлорида натрия и развести содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) и легком покачивании в течение 2-3 мин. В результате получают маточный раствор тромбина (хранится без существенной потери коагуляционной активности при температуре  +2...+8оС до 30 дней).

2. Для приготовления рабочего раствора тромбина смешать в пробирке один объем маточного раствора тромбина с 14 объемами рабочего раствора буфера. Полученный рабочий раствор тромбина при добавлении к разведенной контрольной плазме (см. Проведение анализа) должен иметь активность 15-16 с. В случае необходимости к раствору добавить небольшое количество буфера или маточного раствора тромбина для получения требуемой активности последнего.

Рабочий раствор тромбина для сохранения активности рекомендуется готовить в силиконированной или пластиковой (полистироловой) пробирке, не прогревать при температуре +37оС и  хранить при комнатной температуре (+18...+25оС) до использования.

В. Разведение контрольной плазмы

Разводится аналогично (см. выше). Контрольную плазму во втором флаконе разводят и применяют по мере необходимости.

3. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. Поместить 0,2 мл исследуемой плазмы в пробирку, прогреть 1 мин при +37оС. При работе на коагулометре в кювету внести и прогреть в течение 1 мин 0,1 мл плазмы.

2. Добавить 0,2 мл рабочего раствора тромбина (имеющего температуру +18...+25оС!) и включить секундомер (в коагулометрическом варианте выполнения методики в кювету внести 0,1 мл раствора тромбина и начать отсчет времени свертывания).

В мануальном варианте анализа отметить время свертывания (образования фибрина) при периодическом покачивании пробирки.

4. ЧТЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результат выражают в секундах, сравнивают время свертывания контрольной и исследуемой плазмы. В норме тромбиновое время составляет 14-17 с. Укорочение тромбинового времени свертывания, как правило, свидетельствует о гиперфибриногенемии. Чаще при обследовании больных с патологией системы гемостаза встречается удлинение тромбинового времени, что может быть обусловлено следующими причинами:

·      присутствие в крови быстродействующих антикоагулянтов (гепарин и др.);

·      образование и накопление в кровотоке продуктов деградации фибриногена/фибрина (ПДФг/Фн), обладающих антитромбиновой активностью;

·      гипофибриногенемия;

·      дисфибриногенемия (качественный дефект фибриногена);

Полная несвертываемость плазмы под влиянием тромбина наблюдается сразу после внутривенного введения терапевтических доз (5000-10000 ед) гепарина.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор в разной комплектации рассчитан на проведение 50 или 400 анализов при расходе раствора тромбина по 0,2 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2...+8оС в течение всего срока годности набора (18 мес. – для набора на 50 анализов и 24 мес. для набора на 400 анализов). Допускается хранение при температуре до +25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 1 мес с момента вскрытия его компонентов, а при дробном использовании предварительно разведенных и замороженных компонентов набора - 2 мес. (см. ниже).

Маточный раствор тромбина можно хранить при температуре +2...+8оС не более 30 дней. Для увеличения срока годности маточного раствора тромбина с 1 до 2 мес рекомендуется сразу после разведения разделить маточный раствор тромбина на 2 равные части, одну из которых в герметично закрытом виде хранить при температуре

-8...-20оС.

Рабочий раствор тромбина можно хранить при комнатной температуре (+18...+25оС) не более 2 ч или не более 6 ч при температуре +2...+8оС.

Контрольную плазму после разведения можно хранить при температуре +18...+25оС не более 3 ч.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2...+8оС не более 1 месяца. Для увеличения срока годности рабочего раствора буфера с 1 до 2 мес. рекомендуется сразу после разведения разделить этот раствор на 2 равные части, одну из которых в герметично закрытом виде хранить при температуре -8...-20оС.

ЛИТЕРАТУРА:

Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: \"Ньюдиамед-АО\", 2001. - 296 с.

Прочитано 3375 раз
Другие материалы в этой категории: « Трис-буфер с гепарином 3,5 мл АПТВ-EI-тест »

Каталог

Лаборатория

Гинекология

Реанимация

РОБОТЫ-ТРЕНАЖЕРЫ

Мед. одежда

Физиотерапия

Отоларингология

Офтальмология

Мед. мебель

610050, г.Киров, ул.Ульяновская, 2/1
8-(8332) 29-43-35