Диагностические наборы
8-(8332) 29-43-35
Регистрация
|

Тех-Фибриноген-тест 30 опр.

Оцените материал
(0 голосов)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения концентрации фибриногена

 

Тех-Фибриноген-тест

на 30 и 100 определений

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для быстрого количественного определения содержания фибриногена в плазме крови (хронометрический метод по Clauss) на коагулометре.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода. Заключается в определении времени свертывания разбавленной цитратной плазмы избытком тромбина. Время свертывания при этом пропорционально концентрации фибриногена, которую определяют по калибровочному графику.

Состав набора на 30 определений:

1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 150 ед. NIH)  -  2 фл.

2. Растворитель для тромбина, 3,5 мл  - 1 фл.

3. Стандарт-плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушенная)  - 1 фл.

4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М),  5 мл  - 1 фл.

На 100 определений:

1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 500 ед. NIH)  -  2 фл.

2. Растворитель для тромбина, 10,5 мл  - 1 фл.

3. Стандарт-плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушеная)  - 1 фл.

4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М),  10 мл  - 1 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения - в диапазоне от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы).

Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 10%.

Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

·      Центрифуга;

·      Коагулометр любого типа;

·      Дозатор пипеточный на 0,1 мл - 1,0 мл;

·      Пробирки стеклянные;

·      Цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

·      Вода дистиллированная;

·      Перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование - сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз, избыток цитрата натрия и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.

Перед проведением анализа плазма разводится буфером в 10 раз (0,2 мл плазмы + 1,8 мл трис-буфера).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

 

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение концентрированного буфера

Содержимое одного флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 100 или 200 мл[1]. В результате получают рабочий раствор буфера.

Б. Разведение тромбина

В один флакон с тромбином внести (точно!) 1,5 или 5,0 мл растворителя для тромбина (см. сноску внизу) и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) и энергичном покачивании в течение 2 мин. В результате получают раствор тромбина. Тромбин во втором флаконе разводят по необходимости.

В. Разведение стандарт-плазмы и приготовление
калибровочных растворов

Во флакон со стандарт-плазмой внести (точно!) 1,0 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) и слабом покачивании в течение 3 мин. В результате получают стандарт-плазму с концентрацией фибриногена 2,60 г/л.

Разведенную стандарт-плазму делят на две равные части, одну из которых замораживают при температуре -16...-20оС (для возможного повторного приготовления калибровочных растворов), а вторую разводят в соответствии с приведенной ниже схемой:

Номер

раствора

Стандарт-плазма

и ее разведения (мл)

+

Буфер

( мл)

Разведение

Концентрация фибриногена, г/л

1

0,2 мл

+

0,8

1 : 5

5,20

2

0,5 мл раствора 1

+

0,5

1 : 10

2,60

3

0,5 мл раствора 2

+

0,5

1 : 20

1,30

4

0,5 мл раствора 3

+

0,2

1 : 28

0,92

Примечание: для оптико-механического коагулометра CGL 2110 фирмы СОЛАР (Беларусь) раствор № 4 не применяется.

2. ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

1. В кювету коагулометра внести 0,2 мл раствора 1 (см. схему).

2. Инкубировать при температуре +37оС 1 мин.

3. В ту же кювету добавить 0,1 мл рабочего раствора тромбина, имеющего комнатную температуру (+18...+25оС) и начать отсчет времени свертывания.

4. Аналогично определить время свертывания со 2, 3 и 4 калибровочным раствором.

5. По полученным данным построить калибровочную кривую (см. рисунок), где по оси ординат отмечают время свертывания (с), а по оси абсцисс - концентрацию фибриногена (г/л) в соответствии с приготовленными разведениями.

 

Рис. Координатная сетка и пример построения калибровочной кривой.

3. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. В кювету коагулометра внести 0,2 мл разведенной (см. раздел \"Приготовление анализируемых образцов\") исследуемой плазмы.

2. Инкубировать при температуре +37оС 1 мин.[2]

3. В ту же кювету добавить 0,1 мл рабочего раствора тромбина, имеющего комнатную температуру (+18...+25оС) и начать отсчет времени свертывания.

4. ЧТЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Обычно время свертывания разведенной исследуемой плазмы составляет 4-40 с. По калибровочной кривой находят концентрацию фибриногена в исследуемом образце  (в диапазоне 0,7-6,0 г/л для оптических коагулометров и 0,9-6,0 г/л для коагулометров, работающих на механическом принципе).

Для коагулометра CGL 2110 фирмы СОЛАР (Беларусь) диапазон измеряемых концентраций фибриногена в связи с конструктивными особенностями прибора составляет 1,2-5,0 г/л.

При определении концентрации фибриногена (в разведении плазмы 1+9), близкой к крайним значениям измеряемого диапазона (более 6,0 г/л или менее 0,9 г/л), рекомендуется повторить анализ с другим разведением исследуемого образца плазмы (соответственно 1+19 или 1+4). Далее, полученный по калибровочной кривой результат соотвественно уменьшают или увеличивают в 2 раза.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор в разной комплектации рассчитан на проведение 30 или 100 определений  при расходе раствора тромбина по 0,1 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2...+8оС в течение всего срока годности набора (24 мес.). Допускается хранение при температуре до +25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 1 неделю с момента вскрытия его компонентов.

Раствор тромбина можно хранить при температуре +2...+8оС не более 3 дней; не замораживать.

Растворитель для тромбина после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2...+8оС не более 1 недели; не замораживать.

Стандарт-плазму после разведения можно хранить при комнатной температуре +18...+25оС не более 3 ч или не более 1 недели при температуре -16...-20оС.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2...+8оС не более 1 мес.

ЛИТЕРАТУРА:

Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: \"Ньюдиамед-АО\", 2001. - 296 с.



[1] см. варианты комплектации набора реагентов «Тех-Фибриноген-тест»

[2] Инкубацию проводят в термостате коагулометра

Прочитано 2946 раз

Каталог

Лаборатория

Гинекология

Реанимация

РОБОТЫ-ТРЕНАЖЕРЫ

Мед. одежда

Физиотерапия

Отоларингология

Офтальмология

Мед. мебель

610050, г.Киров, ул.Ульяновская, 2/1
8-(8332) 29-43-35