Диагностические наборы
8-(8332) 29-43-35
Регистрация
|

Тех-Фактор VII-тест

Оцените материал
(0 голосов)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для определения

активности фактора VIII

Тех-Фактор VIII-тест

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор Тех-Фактор VIII-тест предназначен для количественного определения фактора VIII в плазме крови. Определение фактора VIII используется для диагностики гемофилии А, для контроля заместительной терапии больных гемофилией А концентратами фактора VIII, а также для диагностики тромбофилии, обусловленной повышенным уровнем фактора VIII.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода. Определяют время свертывания плазмы крови в смеси, содержащей дефицитную по фактору VIII плазму, разведенную исследуемую плазму и АПТВ-реагент, в присутствии ионов кальция. Количественное определение активности фактора VIII выполняют по графику зависимости активности фактора VIII (в %) от времени свертывания в АПТВ-тесте.

Состав набора:

1. Дефицитная по фактору VIII плазма (лиофильно высушенная плазма крови человека, уровень фактора VIII в которой не выше 1%), 2,0 мл - 1 фл.

2. Контрольная плазма (пулированная от 25 доноров лиофильно высушенная плазма крови человека с известным содержанием фактораVIII), 1,0 мл - 1 фл.

3. АПТВ-реагент, жидкий (раствор эллаговой кислоты, содержащий мозговые фосфолипиды человека), готовый к использованию 2,5 мл - 1 фл.

4. Кальция хлорид 0,025 М, 10 мл - 1 фл.

5. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1; 1 М, рН 7,4), 5 мл  - 1 фл.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Линейность определения - в диапазоне от 1 до 100%.

Коэффициент вариации результатов определения АПТВ не превышает 6%.

Допустимый разброс результатов определения уровня фактора VIII  в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%. Тест чувствителен к присутствию в крови антикоагулянтов.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

·      Коагулометр; при отсутствии коагулометра - секундомер, термобаня на  +37оС;

·      Пипетки вместимостью  0,1 мл, 0,5 мл, 1,0 мл;

·      Мерный цилиндр на 100 мл;

·      Пробирки стеклянные;

·      Вода дистиллированная;

·      Перчатки резиновые хирургические.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата  натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование - сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы крови, имеющей сгустки, гемолиз и полученной более 2 ч назад.

Перед проведением анализа все исследуемые образцы развести рабочим раствором буфера в 5 раз (0,1 мл образца + 0,4 мл рабочего раствора буфера).

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

А. Разведение дефицитной по фактору VIIIплазмы

В флакон с дефицитной по фактору VIII плазмой внести 2,0 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) в течение 3 мин. Перед использованием дефицитная по факторй VIII плазма должна быть выдержана при комнатной температуре в течение 15 мин.

Разведенную дефицитную по фактору VIII плазму можно использовать в течение 3 ч в условиях хранения при комнатной температуре (+18...+25оС), возможно замораживание при температуре -15...-20оС на срок до двух недель.

Б. Разведение контрольной плазмы

Во флакон с контрольной плазмой внести 1,0 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (+18...+25оС) в течение 3 мин. Перед использованием контрольная плазма должна быть выдержана при комнатной температуре в течение 15 мин.

Разведенную контрольную плазму можно использовать в течение 3 ч в условиях хранения при комнатной температуре  (+18...+25оС), возможно замораживание при температуре -15...-20оС на срок до двух недель.

В. Приготовление АПТВ-реагента

АПТВ-реагент готов к применению, перед использованием встряхнуть.

Г. Приготовление раствора хлорида кальция

Хлорид кальция готов к применению.

Д. Разведение концентрированного буфера

Содержимое флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 100 мл. В результате получают рабочий раствор буфера.

Приготовление разведений для построениякалибровочного графика

 

Пробирка, №

1

2

3

4

5

6

Буфер, мл

0,8 мл

0,5 мл

0,5 мл

0,5 мл

0,5 мл

0,5 мл

Контрольная плазма с аттестованным значением
активности фактора VIII (100%)

0,2 мл

-//-

-//-

-//-

-//-

-//-

Перемешать и перенести в другую пробирку

     ▼         ▲▼          ▲▼          ▲▼          ▲▼        ▲

      ╚0,5мл╝  ╚0,5 мл╝  ╚0,5 мл╝ ╚0,5 мл╝ ╚0,1 мл╝

Получаемое
разведение

1:5

1:10

1:20

1:40

1:80

1:500

Активность фактора VIII

100%

50%

25%

12,5%

6,25%

1%

Е. Построение калибровочной кривой

Для каждого разведения калибровочной плазмы выполнить определения дважды, средний результат отметить на калибровочной кривой. Соединить нанесенные точки.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Коагулометрический вариант:

1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл разведенной в 5 раз исследуемой плазмы (или одного из разведений контрольной плазмы при построении калибровочного графика).

2. В кювету добавить 0,1 мл дефицитной по фактору VIII плазмы и прогреть смесь при +37оС в течение 1 мин.

3. В кювету добавить 0,1 мл АПТВ-реагента, имеющего комнатную температуру.

4. Через 3 мин к смеси добавить 0,1 мл рабочего раствора хлорида кальция (имеющего температуру +37оС) и зарегистрировать время свертывания (см. также Инструкцию к коагулометру).

5. Используя калибровочную кривую, найти активность фактора VIII.

Мануальный вариант:

1. К 0,1 мл разведенной в 5 раз исследуемой плазмы (или одного из разведений контрольной плазмы при построении калибровочного графика), взятой в пробирку, добавить 0,1 мл дефицитной по фактору VIII плазмы  и 0,1 мл АПТВ-реагента.

2. Пробирку встряхнуть и поместить на водяную баню при температуре +37оС.

3. Через 3 мин к смеси добавить 0,1 мл рабочего раствора хлорида кальция (имеющего температуру +37оС) и включить секундомер.

4. Достать пробирку из бани и отметить время свертывания (образования фибрина) при периодическом покачивании пробирки.

5. Используя калибровочную кривую, найти активность фактора VIII.

В норме уровень фактора VIII находится в диапазоне 50-150%.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор рассчитан на проведение 20 определений при расходе рабочих растворов реагентов  по 0,1 мл на 1 анализ.

Хранение набора должно проводиться при температуре +2...+8оС в течение всего срока годности набора (18 мес.). Допускается хранение при температуре до +25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Во вскрытом флаконе АПТВ-реагент должен находится в течение рабочего дня при комнатной температуре, по окончании которого реагент следует хранить при температуре +2...+8оС. Такое чередование температурного режима допускается до полного расходования объема АПТВ-реагента на протяжении 2 недель.

Во вскрытом (герметично закрытом) флаконе раствор хлорида кальция следует хранить при температуре  +2...+8оС. Необходимый для проведения исследований (на протяжении рабочего дня) объем раствора хлорида кальция необходимо отлить в отдельную пробирку или флакон, где этот раствор может храниться при температуре +37оС  в течение 4 ч или при комнатной температуре не более 1 дня. Не допускается сливание остатков этого раствора после прогревания во вскрытый герметично закрытый флакон с хранящимся при температуре +2...+8оС раствором хлорида кальция. Во вскрытом флаконе раствор хлорида кальция может храниться до полного расходования на протяжении 2 недель.

Разведенную контрольную плазму можно использовать в течение 3 ч в условиях хранения при комнатной температуре  (+18...+25оС), возможно замораживание при температуре   -15...-20оС на срок до двух недель.

Разведенную дефицитную по фактору VIII плазму можно использовать в течение 3 ч в условиях хранения при комнатной температуре  (+18...+25оС), возможно замораживание при температуре   -15...-20оС на срок до двух недель.

 

 

ЛИТЕРАТУРА:

1. Елыкомов В.А., Тамарин И.В., Белых С.И., Момот А.П., Сердюк Г.В. Унифицированная методика одностадийного количественного определения факторов VIII и IX. Часть I.  (По результатам исследования рабочей группы Союзной проблемной комиссии “Патология гемостаза”). //Гематол. и трансфузиол. - 1991. - N 4. - С. 33-35.

2. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: \"Ньюдиамед-АО\", 2001. - 296 с.

Прочитано 3084 раз

Каталог

Лаборатория

Гинекология

Реанимация

РОБОТЫ-ТРЕНАЖЕРЫ

Мед. одежда

Физиотерапия

Отоларингология

Офтальмология

Мед. мебель

610050, г.Киров, ул.Ульяновская, 2/1
8-(8332) 29-43-35